HE染色操作步骤
苏木精 — 伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ,简称HE染色法 ,石蜡切片技术里常用的染色法之一 。苏木精染液为碱性 ,主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色 ;伊红为酸性染料 ,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。
适用范围
(01)组织学、胚胎学、病理学教学与科研。
he染色实验具体步骤
(01)取材,固定:固定液——甲醛(福尔马林)从人或动物新鲜尸体上取下组织块(一般厚度不超过0.5厘米)投入预先配好的固定液中(10%福尔马林,Bouin氏固定液等)使组织、细胞的蛋白质变性凝固,以防止细胞死后的自溶或细菌的分解,从而保持细胞本来的形态结构。
(02)修剪,脱水,透明:脱水剂——酒精透明剂——二甲苯不同组织固定时间不同,固定成功后需要修剪25px*25px*5px,放入包埋盒中,流水冲洗(去除组织中的固定液)30分钟。至于不同浓度的酒精脱水,一般用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂,逐渐脱去组织块中的水份。再将组织块置于既溶于酒精,又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明,以二甲苯替换出组织块的中酒精,才能浸蜡包埋。
(03)浸蜡,包埋:石蜡将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中,放入溶蜡箱保温。待石蜡完全浸入组织块后进行包埋,冷却凝固成块即成。包埋好的组织块变硬,才能在切片机上切成很薄的切片。
(04)切片、展片、烤片:将包埋好的蜡块固定于切片机上,切成薄片,一般为5—8微米厚。切下的薄片往往皱折,要放到加热的水中烫平,再贴到载玻片上,放45℃恒温箱中烘干。
(05)脱蜡、至水、染色:脱蜡剂:二甲苯至水剂:酒精染色剂:苏木精水溶液,酒精伊红染
色液
(01)染色前,须用二甲苯脱去切片中的石蜡,再经由高浓度到低浓度酒精,最后入蒸馏水,就可染色。苏木精(Hematoxylin,H)是一种碱性染料,可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色,被碱性染料染色的结构具有嗜碱性。伊红(Eosin,E)是一种酸性染料,能将细胞质染成红色或淡红色,被酸性染料染色的结构具有嗜酸性。
HE染色过程:
(01)将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟。
(02)酸水及氨水中分色,各数秒钟。
(03)流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻。
(04)入70%和90%酒精中脱水各10分钟。
(05)入酒精伊红染色液染色2—3分钟。
脱水、透明:同2步骤
(01)染色后的切片经纯酒精脱水,再经二甲苯使切片透明。
封片
(01)将已透明的切片滴上树胶,盖上盖玻片封固。待树胶略干后,贴上标笺,切片标本就可使用。生理盐水、蒸馏水、PBS实验必备溶剂,里面的很多试剂不用亲自买,应该有专门做切片和染色的实验室吧,都是公用的哦!!
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