重组质粒的电转化法
最近小编收到很多问题,其中一个就是下面小编为大家整理一下关于重组质粒的电转化法的步骤,希望这些方法能够帮助到大家。
操作方法
(01)首先,将0.1cm的电击杯放在冰上进行预冷,冻存的感受态细胞取出冰上溶解。
(02)然后,用100微升的感受态细胞加入1微升纯化的连接液,或者加入0.5微升未纯化的连接液,小心混匀,在冰上放置二十分钟。
(03)然后,将混合液加入预冷的电击杯中,注意擦干杯外的水,防止电火花,放入电转化仪的反应槽内,接上电源。
(04)然后,在3kv、200电阻和25微F的BioRad电转化仪,0.2电转化杯,时间常数在4.5-5ms之间,然后进行点击。
(05)然后,在听到蜂鸣声后,向电击杯中迅速加入1ml37摄氏度的保温的SOC液体培养基,将混合液洗出,转移到1.5ml的离心管中。
(06)最后,在37摄氏度220-250r/min复苏培养一小时,使其充分表达抗性,取适量涂平板,将平板倒置在培养箱中,37摄氏度下培养16-24小时。
特别提示
上述方法为小编整理所得,希望能够帮助到大家。
上述图片来源于网络,可能与方法不符。
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