聚合酶鏈式反應(PCR)
聚合酶鏈式反應(Polymerase
Chain Reaction ,PCR)是80年代中期發展起來的體外核酸擴增技術。
操作方法
(01)模板DNA的變性:模板DNA經加熱至93℃左右一定時間後,使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備;
(02)模板DNA與引物的退火(復性):模板DNA經加熱變性成單鏈後,温度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合;
(03)引物的延伸:DNA模板--引物結合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP為反應原料,靶序列為模板,按鹼基配對與半保留複製原理,合成一條新的與模板DNA 鏈互補的半保留複製鏈。重複循環變性--退火--延伸三過程,就可獲得更多的“半保留複製鏈”,而且這種新鏈又可成為下次循環的模板。
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