HE染色操作步驟
蘇木精 — 伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ,簡稱HE染色法 ,石蠟切片技術裏常用的染色法之一 。蘇木精染液爲鹼性 ,主要使細胞核內的染色質與胞質內的核酸着紫藍色 ;伊紅爲酸性染料 ,主要使細胞質和細胞外基質中的成分着紅色 。HE染色法是組織學、胚胎學、病理學教學與科研中最基本、使用最廣泛的技術方法。
適用範圍
(01)組織學、胚胎學、病理學教學與科研。
he染色實驗具體步驟
(01)取材,固定:固定液——甲醛(福爾馬林)從人或動物新鮮屍體上取下組織塊(一般厚度不超過0.5釐米)投入預先配好的固定液中(10%福爾馬林,Bouin氏固定液等)使組織、細胞的蛋白質變性凝固,以防止細胞死後的自溶或細菌的分解,從而保持細胞本來的形態結構。
(02)修剪,脫水,透明:脫水劑——酒精透明劑——二甲苯不同組織固定時間不同,固定成功後需要修剪25px*25px*5px,放入包埋盒中,流水沖洗(去除組織中的固定液)30分鐘。至於不同濃度的酒精脫水,一般用由低濃度到高濃度酒精作脫水劑,逐漸脫去組織塊中的水份。再將組織塊置於既溶於酒精,又溶於石蠟的透明劑二甲苯中透明,以二甲苯替換出組織塊的中酒精,才能浸蠟包埋。
(03)浸蠟,包埋:石蠟將已透明的組織塊置於已溶化的石蠟中,放入溶蠟箱保溫。待石蠟完全浸入組織塊後進行包埋,冷卻凝固成塊即成。包埋好的組織塊變硬,才能在切片機上切成很薄的切片。
(04)切片、展片、烤片:將包埋好的蠟塊固定於切片機上,切成薄片,一般爲5—8微米厚。切下的薄片往往皺摺,要放到加熱的水中燙平,再貼到載玻片上,放45℃恆溫箱中烘乾。
(05)脫蠟、至水、染色:脫蠟劑:二甲苯至水劑:酒精染色劑:蘇木精水溶液,酒精伊紅染
色液
(01)染色前,須用二甲苯脫去切片中的石蠟,再經由高濃度到低濃度酒精,最後入蒸餾水,就可染色。蘇木精(Hematoxylin,H)是一種鹼性染料,可將細胞核和細胞內核糖體染成藍紫色,被鹼性染料染色的結構具有嗜鹼性。伊紅(Eosin,E)是一種酸性染料,能將細胞質染成紅色或淡紅色,被酸性染料染色的結構具有嗜酸性。
HE染色過程:
(01)將已入蒸餾水後的切片放入蘇木精水溶液中染色數分鐘。
(02)酸水及氨水中分色,各數秒鐘。
(03)流水沖洗1小時後入蒸餾水片刻。
(04)入70%和90%酒精中脫水各10分鐘。
(05)入酒精伊紅染色液染色2—3分鐘。
脫水、透明:同2步驟
(01)染色後的切片經純酒精脫水,再經二甲苯使切片透明。
封片
(01)將已透明的切片滴上樹膠,蓋上蓋玻片封固。待樹膠略幹後,貼上標箋,切片標本就可使用。生理鹽水、蒸餾水、PBS實驗必備溶劑,裏面的很多試劑不用親自買,應該有專門做切片和染色的實驗室吧,都是公用的哦!!
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